Исследование дезинфицирующей активности дезинфицирующего средства Зисептал 500 (Zyseptal 500) в отношении возбудителя африканской чумы свиней

Авторы: Опыт проведен в ФГБНУ ФИЦВиМ

Опубликовано в: Ветеринария и кормление • №2 • 2026

КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: Зисептал 500 (Zyseptal 500), вирус африканской чумы свиней, дезинфицирующее действие, лабораторные испытания.
ОБЪЕКТ ИССЛЕДОВАНИЙ: представленный образец дезинфицирующего средства Зисептал 500 (Zyseptal 500), организация-производитель: «Chia Tai Kangrui (Henan) Bio-technology Co., Ltd.», КНР.
Средство представляет собой мелкогранулированный порошок розового цвета с характерным запахом. В качестве действующих веществ содержит: калия пероксомоносульфат, натрия хлорид; а также вспомогательные вещества: додецилбензолсульфонат натрия (ПАВ), амарант, кислоту лимонную, ароматизатор лимонный, натрия гексаметафосфат.
ЦЕЛЬ РАБОТЫ: изучение дезинфицирующего действия дезинфицирующего средства Зисептал 500 (Zyseptal 500) в отношении вирулентного вируса африканской чумы свиней на контаминированных поверхностях. Изучение бактерицидного в отношении тест - микроорганизмов 1, 2 групп устойчивости к действию химических веществ в лабораторных условиях.
В лабораторных условиях испытана эффективность дезинфицирующего действия средства при обеззараживании контаминированных вирусом африканской чумы свиней невпитывающих поверхностей, с подтверждением полноты инактивации вируса в культуре клеток лейкоцитов свиней. Исследованы бактериостатическая и минимальная бактерицидная концентрации средств с использованием тест-микроорганизмов 1, 2 групп устойчивости.
 
ВВЕДЕНИЕ
В системе санитарных, противоэпидемических и противоэпизоотических мероприятий, обеспечивающих благополучие страны по инфекционным болезням, повышение продуктивности животных и санитарное качество продуктов, сырья и кормов животного происхождения, дезинфекция занимает одно из важных мест. Под дезинфекцией понимают уничтожение на объектах или удаление из них патогенных и условно-патогенных микроорганизмом. Основное назначение дезинфекции – разорвать эпизоотическую цепь путем воздействия на ее важное звено – фактор передачи возбудителя болезни от источника инфекции к восприимчивому организму.
В последние годы на рынке дезинфицирующих средств представлен большой ассортимент препаратов отечественного и импортного производства. Но при всем многообразии дезинфицирующих средств, количество компонентов, входящих в их состав, весьма ограничено, при чем целый ряд соединений обладает высокой бактерио- и вирусстатической активностями и низким бактерицидным и вирулицидным действием, что не позволяет им эффективно обеззараживать контаминированные поверхности, особенно загрязненные органическими веществами. Проблема внедрения новых высокоэффективных дезинфектантов приобрела особую актуальность в связи с распространением АЧС на территории ряда европейских стран и РФ.
Вирус АЧС контролируется путем выбраковки инфицированных свиней и соблюдением норм биобезопасности, и в настоящее время это наиболее эффективный способ остановить распространение инфекции.
Учитывая то, что для большого количества дезинфектантов не изучена их вирулицидная активность в отношении вируса АЧС, целесообразно проведение работ по обеспечению ветеринарной дезинфекционной практики протестированными высокоэффективными дезсредствами. 

ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ
Испытания выполнены в рамках договора № 04-17/03 от 12 февраля 2025г. согласно Руководству Р 4.2.3676-20 «Методы лабораторных исследований и испытаний дезинфекционных средств для оценки их эффективности и безопасности» и методическим указаниям МУК 4.2.1890-04 «Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам».

ОЦЕНИВАЕМЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ
Инфекционная активность вируса АЧС штамм Ставрополь 01/08 в культуре клеток лейкоцитов свиней.
Дезинфицирующее действие дезинфицирующего средства Зисептал 500 (Zyseptal 500) на вирус африканской чумы свиней с использованием тест-объектов (Впитывающие – бетон, невпитывающие – металл) и выделение вируса АЧС в культуре клеток лейкоцитов свиней.

ОСНОВНАЯ ЧАСТЬ
1.    Материалы:

•     Вирус африканской чумы свиней штамм Ставрополь 01/08 (вируссодержащая кровь с активностью 106,5ГАЕ50/см3).
•     Тест-микроорганизмы (Е. coli штамм К-12 и S. aureus штамм 209-Р).
•     Образец дезинфицирующего средства Зисептал 500 (Zyseptal 500).
•     Культура клеток лейкоцитов свиней (ЛС).

 
2.    Методы
2.1    Получение культур тест-микроорганизмов
В пробирки со скошенным дрожжевым триптон-соевым агаром (ДТСА) засевали предварительно проверенные на отсутствие посторонней контаминации бактериальной и грибной микрофлорой культуры тест-микроорганизмов (Escherichia coli и Staphylococcus aureus) в посевной дозе 
103–106 /мл. Посевы инкубировали при температуре (36±1)°С в течение 
18–20 ч. Суточные культуры контролировали на отсутствие контаминантов. Для этой цели из полученных культур готовили мазки, окрашивали по Грамму и подвергали световой микроскопии. Затем агаровые культуры смывали физиологическим раствором.

2.2    Определение бактериостатической, бактерицидной активности дезинфекционных средств и влияния на их уровень высокомолекулярного белка
Предварительную оценку бактерицидного и бактериостатического действия дезинфицирующего средства Зисептал 500 (Zyseptal 500) проводили методом серийных разведений согласно методическим указаниям «Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам»,  МУК 4.2.1890-04 в нашей модификации.
Для определения минимальной бактерицидной концентрации средства Зисептал 500 (Zyseptal 500) готовили его серийные двукратные разведения на дрожжевом триптон-соевом бульоне (ДТСБ) от 1,0 % до 0,0009% в объеме 2,0 мл. С использованием денситометра DEN-1 концентрацию микробных клеток в суспензиях тест-микроорганизмов (Е. coli штамм К-12 и S. aureus штамм 209-Р) доводили до 0,5 ЕД MF (106 м.т./мл).
В приготовленные разведения средства вносили инокулюм одной из культур в объеме 0,2 мл и инкубировали при температуре 37°С. Результаты учитывали визуально через 18–20 часов инкубации при 37°С по появлению роста культуры в пробирках (бактериостатическое действие). Минимальную подавляющую концентрацию (МПК) определяли по наименьшей концентрации средства, которая подавляла видимый рост тест-микроорганизма. Контролем служили бульонные культуры микроорганизмов, в которые препарат не вносился.
Бактерицидное действие средств изучали по окончании исследований по определению бактериостатического действия. Для этого из пробирок, в которых видимый рост отсутствовал, по 0,2 мл высевали на ДТСА. Посевы инкубировали при 37°С. Учет результатов проводили через 18–24 часа инкубирования и затем через 5 суток. Минимальную бактерицидную дозу определяли по наименьшей концентрации средства, при которой отсутствовал рост микроорганизма на ДТСА.
Для изучения влияния высокомолекулярного белка на антимикробную активность проводили аналогичные испытания с добавлением в ДТСБ нормальной сыворотки крови лошади в конечной концентрации 40 %.

2.3    Получение первичной культуры клеток лейкоцитов свиней 
Образцы гепаринизированной крови брали из краниальной полой вены от подсвинков живой ммассой 20–25 кг, наслаивали на градиент Фиколла–Гипака и центрифугировали (22°C, 400×g, 30 мин). Клетки из интерфазы собирали и промывали сбалансированным физиологическим раствором Хенкса три раза путем центрифугирования (4°C, 400×g, 5 мин). В качестве питательной среды использовалась питательная среда Игла МЕМ с 
L-глютамином с добавлением 10% сыворотки донорской свиной крови. Первичную культуру клеток ЛС распределяли по 24-луночным пластиковым микропанелям или культуральным флаконам и инкубировали в инкубаторе с СО2 в следующих условиях: концентрация СО2 5%, относительная влажность 90% и температура (37,0±0,5)°C.

2.4    Определение инфекционной активности вируса АЧС
Для определения инфекционной активности вируса АЧС готовили десятикратные последовательные разведения вируссодержащего материала на физиологическом растворе с 10-1 по 10-8 по четыре лунки для каждого десятикратного разведения с помощью реакции гемадсорбции. Результаты учитывали по наличию явления гемадсорбции через 5–7 дней. Титры вируса рассчитывали в соответствии с методом, описанным Б.А. Кербером в модификации И.П. Ашмарина (1), и выражали в 50% гемадсорбирующих единицах на мл.

2.5    Оценка дезинфицирующего действия средства Зисептал 500 (Zyseptal 500)
При исследованиях с вирусом, использовали вирулентный эпизоотически значимый вирус АЧС. На стерильные тест-объекты, впитывающие – бетон и невпитывающие – металл наносили по 1,5 см3 вируссодержащей жидкости на 100 см2 площади. В качестве механической защиты вируса использовали среду Игла МЕМ, содержащую 40% сыворотки крови КРС.  Смесь равномерно распределяли по поверхности тестов, после чего  их подсушивали 1 час. Испытуемые растворы дезинфицирующего средства (согласно таблице 1) равномерно наносили методом орошения на тест-объекты из расчёта 0,3 л/м2 площади.
На контрольные тест-объекты вместо раствора средства наносили такое же количество воды, которую использовали для приготовления раствора препарата.
С тест-объектов, обработанных испытуемыми растворами средства, материал для исследования отбирали через соответствующий период времени (согласно таблице 1).
Вирусный материал смывали, добавляли по 4,5 см3 физиологического раствора, экстрагировали при комнатной температуре в течение 30 минут, затем центрифугировали 15 минут при 3000 об/мин. Надосадочную жидкость использовали для инокуляции культуры клеток ЛС.
Экстрактом с каждого тест-объекта по 0,5 мл инфицировалось 8 лунок для каждого показателя, 8 лунок – контроль в 24-луночных культуральных панелях с монослоем клеток. После внесения надосадочной жидкости в лунки плашка инкубировалась в течение 1 часа при (37±0,5)ºС с 5% CO2 в инкубаторе (“контакт”), после чего производилось добавление 0,5 мл среды Игла МЕМ с 5% FBS и 1% суспензии эритроцитов свиньи в каждую лунку. Плашку с культурой клеток инкубировали при (37±0,5)ºС с 5% CO2 в течение 120–144 часов.

Учёт результатов производится через 120–144 часов после внесения образцов. Учёт результатов:

•     наличие гемадсорбции свидетельствует о присутствии в образце вируса АЧС;
•     отсутствие явления гемадсорбции подтверждает отсутствие вируса АЧС в образце. В данном случае проводится три последовательных пассажа в культуре клеток ЛС.

Дезинфекцию признавали эффективной, если при заражении культуры клеток ЛС материалом с исследуемых тест-объектов не отмечали гемадсорбции в течение 3 пассажей.

Таблица 1

3.    РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
Антимикробную активность дезинфицирующих средств изучали в жидких и на твердых питательных средах с возбудителями колибактериоза и стафилококкоза с использованием белковой нагрузки и без нее.
Минимальную бактерицидную концентрацию (МБК) определяли методом серийных разведений в ДТСБ с последующим высевом на ДТСА на чашках Петри. В таблице 2 представлены результаты определения бактериостатического и бактерицидного действия дезинфицирующего средства Зисептал 500 (Zyseptal 500).

Таблица 2

Примечание: б/с -бактериостатическая активность; б/ц - бактерицидная активность.

В результате проведенных испытаний установлено, что средство Зисептал 500 (Zyseptal 500) обладает антимикробной активностью в отношении тест-культур грамотрицательных (Е. coli) и грамположительных (S. aureus) микроорганизмов в следующих концентрациях, принимая средство за 100 % вещество (таблица 2):
МПКE.coli – 0,0312 %;
МБКE.coli – 0,0312 %;
МПКS.aureus – 0,25 %;
МБКS.aureus – 0,25 %;

При добавлении высокомолекулярного белка происходит снижение бактерицидной активности средства в отношении Е. coli в 32 раза, в отношении S. аureus в 2 раза.
Исследование эффективности образца дезинфицирующего средства Зисептал 500 (Zyseptal 500) в отношении вируса АЧС проводили в соответствии с техническим заданием по схеме, представленной в таблице 1. Результаты представлены в таблице 3.

Таблица 3

Результаты, представленные в таблице 3 свидетельствуют о том, что препарат Зисептал 500 (Zyseptal 500) при обработке впитывающей шероховатой и поверхности с белковой нагрузкой эффективен в отношении вируса АЧС в виде 3 % рабочего раствора при экспозиции 1 (один) час. При обработке невпитывающей поверхности с белковой нагрузкой эффективен в отношении вируса АЧС в виде 1,0 % рабочего раствора при экспозиции 1 (один) час.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Дезинфицирующее средство Зисептал 500 (Zyseptal 500) по результатам лабораторных исследований обладает бактерицидной и бактериостатической активностями в отношении тест-культур грамотрицательных (Е. coli) и грамположительных (S. aureus) микроорганизмов обеспечивая их инактивацию при концентрации 0,0312 %  и 0,25 % соответственно от исходной, без добавления белковой нагрузки.
Дезинфицирующее средство Зисептал 500 (Zyseptal 500) полностью обеззараживает тест-поверхности имитирующие объекты свиноводческих помещений (впитывающие шероховатые поверхности из бетона), контаминированные вирусом АЧС с белковой нагрузкой при однократном орошении 3,0 % и выше рабочим раствором при экспозиции 1 (один) час и более при норме расхода 0,3 л/м2.
Дезинфицирующее средство Зисептал 500 (Zyseptal 500) полностью обеззараживает тест-поверхности имитирующие транспортные средства (невпитывающие поверхности из металла), контаминированные вирусом АЧС с белковой нагрузкой при однократном орошении 1,0 % и выше рабочим раствором при экспозиции 1 (один) час и более при норме расхода 0,3 л/м2.
Дезинфицирующее средство Зисептал 500 (Zyseptal 500) может при указанных режимах обработки (концентрация рабочего раствора, время экспозиции, норма расхода) применяться в очагах заражения вирусом АЧС для дезинфекции объектов в соответствии с действующими инструктивными документами.