Исследование дезинфицирующей активности дезинфицирующего средства Зисептал 500 (Zyseptal 500) в отношении возбудителя гриппа птиц

Авторы: Опыт проведен в ФГБНУ ФИЦВиМ

Опубликовано в: Ветеринария и кормление 4-2026

Ключевые слова: Зисептал 500 (Zyseptal 500), вирус гриппа птиц, дезинфицирующее средство, лабораторные испытания.
Резюме: представленный образец дезинфицирующего средства Зисептал 500 (Zyseptal 500), организация-производитель: «Chia Tai Kangrui (Henan) Bio-technology Co., Ltd.», КНР.
Средство представляет собой мелкогранулированный порошок розового цвета с характерным запахом. В качестве действующих веществ содержит: калий пероксомоносульфат, натрия хлорид; а также вспомогательные вещества: натрия додецилбензолсульфонат (ПАВ), амарант, кислоту лимонную, ароматизатор лимонный, натрия гексаметафосфат.
Цель работы: изучение дезинфицирующего действия средства Зисептал 500 (Zyseptal 500) в отношении вирулентного вируса гриппа птиц на контаминированных поверхностях, имитирующих объекты птицеводческих помещений и транспортных средств. Изучение бактерицидного в отношении тест - микроорганизмов I, II групп устойчивости к действию химических веществ в лабораторных условиях.
В лабораторных условиях испытана эффективность дезинфицирующего действия средства, при обеззараживании контаминированных вирусом гриппа птиц поверхностей, имитирующих объекты птицеводческих помещений и транспортных средств с подтверждением полноты инактивации вируса на куриных эмбрионах. Исследованы бактериостатическая и минимальная бактерицидная концентрации средств с использованием тест-микроорганизмов 1, 2 групп устойчивости 

Введение
В системе санитарных, противоэпидемических и противоэпизоотических мероприятий, обеспечивающих благополучие страны по инфекционным болезням, повышение продуктивности животных и санитарное качество продуктов, сырья и кормов животного происхождения, дезинфекция занимает одно из важных мест. Под дезинфекцией понимают уничтожение на объектах или удаление из них патогенных и условно-патогенных микроорганизмов. Основное назначение дезинфекции – разорвать эпизоотическую цепь путем воздействия на ее важное звено – фактор передачи возбудителя болезни от источника инфекции к восприимчивому организму.
В последние годы на рынке дезинфицирующих средств представлен большой ассортимент препаратов отечественного и импортного производства. Но при всем многообразии дезинфицирующих средств, количество компонентов, входящих в их состав, весьма ограничено, при чем целый ряд соединений обладает высокой бактерио- и вирусстатической активностями и низким бактерицидным и вирулицидным действием, что не позволяет им эффективно обеззараживать контаминированные поверхности, особенно загрязненные органическими веществами. Проблема внедрения новых высокоэффективных дезинфектантов приобрела особую актуальность в связи с распространением на территории ряда европейских стран и РФ высокопатогенного гриппа птиц, представляющего угрозу птицеводству страны.
Учитывая то, что для большого количества дезинфектантов не изучена их вирулицидная активность в отношении вируса гриппа птиц, целесообразно проведение работ по обеспечению ветеринарной дезинфекционной практики протестированными высокоэффективными дезсредствами. 

Общие положения
Испытания выполнены в рамках договора № 04-17/17 от 10 ноября 2025г. согласно руководству - Руководство Р 4.2.3676-20 «Методы лабораторных исследований и испытаний дезинфекционных средств для оценки их эффективности и безопасности» и методическим указаниям МУК 4.2.1890-04 «Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам».

Оцениваемые показатели
Инфекционная активность вируса гриппа птиц штамм A/курица/Сергиев-Посад/1/17 (H5N8) в куриных эмбрионах.
Дезинфицирующее действие средства дезинфицирующего Зисептал 500 на вирус гриппа птиц с использованием тест-объектов (впитывающие – бетон и невпитывающие – металл) и выделение вируса гриппа птиц в куриных эмбрионах 9-11 суточного возраста.

ОСНОВНАЯ ЧАСТЬ
1. Материалы:
- Вирус гриппа птиц штамм A/курица/Сергиев-Посад/1/17 (H5N8), инфекционная активность 9,75 lg ЭИД₅₀/см³.
- Тест-микроорганизмы (Е. coli штамм К-12 и S. aureus штамм 209-Р)
- Образец дезинфицирующего средства Зисептал 500.
- Куриные эмбрионы  9 – 11 суточного возраста.

2. Методы
2.1 Получение культур тест-микроорганизмов
В пробирки со скошенным дрожжевым триптон-соевым агаром (ДТСА) засевали предварительно проверенные на отсутствие посторонней контаминации бактериальной и грибной микрофлорой культуры тест-микроорганизмов (Escherichia coli и Staphylococcus aureus) в посевной дозе 10³ – 10⁶ /мл. Посевы инкубировали при температуре (36±1) °С в течение 18-20 ч. Суточные культуры контролировали на отсутствие контаминантов. Для этой цели из полученных культур готовили мазки, окрашивали по Грамму и подвергали световой микроскопии. Затем агаровые культуры смывали физиологическим раствором.
 

2.2 Определение бактериостатической, бактерицидной активности дезинфекционных средств и влияния на их уровень высокомолекулярного белка
Предварительную оценку бактерицидного и бактериостатического действия средства дезинфицирующего Зисептал 500 проводили методом серийных разведений согласно методическим указаниям «Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам», МУК 4.2.1890-04 в нашей модификации.
Для определения минимальной бактерицидной концентрации средства дезинфицирующего Зисептал 500 готовили его серийные двукратные разведения на дрожжевом триптон-соевом бульоне (ДТСБ) от 0,5 % до 0,0009% в объеме 2,0 мл. С использованием денситометра DEN-1 концентрацию микробных клеток в суспензиях тест-микроорганизмов (Е. coli штамм К-12 и S. aureus штамм 209-Р) доводили до 0,5 ЕД MF (10⁶ м.т./мл).
В приготовленные разведения средства вносили инокулюм одной из культур в объеме 0,2 мл и инкубировали при температуре 37°С. Результаты учитывали визуально через 18-20 часов инкубации при 37°С по появлению роста культуры в пробирках (бактериостатическое действие). Минимальную подавляющую концентрацию (МПК) определяли по наименьшей концентрации средства, которая подавляла видимый рост тест-микроорганизма. Контролем служили бульонные культуры микроорганизмов, в которые препарат не вносился.
Бактерицидное действие средств изучали по окончанию исследований по определению бактериостатического действия. Для этого из пробирок, в которых видимый рост отсутствовал, по 0,2 мл высевали на ДТСА. Посевы инкубировали при 37°С. Учет результатов проводили через 18-24 часа инкубирования и затем через 5 суток. Минимальную бактерицидную дозу определяли по наименьшей концентрации средства, при которой отсутствовал рост микроорганизма на ДТСА.
Для изучения влияния высокомолекулярного белка на антимикробную активность проводили аналогичные испытания с добавлением в ДТСБ нормальной сыворотки крови лошади в конечной концентрации 40%.
 

2.3 Определение инфекционной активности вируса гриппа птиц (ВГП) в куриных эмбрионах (КЭ)
Для определения инфекционной активности ВГП готовили десятикратные последовательные разведения вируссодержащей экстраэмбриональной жидкости (ЭЭЖ) на физиологическом растворе с 10-¹ по 10-⁹. Затем каждым разведением проводили заражение КЭ. Зараженные КЭ инкубировали при температуре 37±0,5^оС в течение 72 часов. Через 72 часа от всех КЭ отбирали ЭЭЖ и ставили реакцию гемагглютинации (РГА). Титр вируса рассчитывали по методу Кербера в модификации И.П. Ашмарина и выражали в lg ЭИД₅₀/см³.

2.4 Оценка дезинфицирующего действия средства дезинфицирующего Зисептал 500
При исследованиях с вирусом, использовали вирулентный эпизоотически значимый ВГП. На стерильные тест-объекты имитирующие объекты птицеводческих помещений (шероховатые впитывающие поверхности из бетона) наносили по 1,5 см³ вируссодержащей жидкости на 100 см² площади. В качестве механической защиты вируса использовали не содержащую вирус ЭЭЖ.  Смесь равномерно распределяли по поверхности тестов, после чего их подсушивают 1 час. Испытуемые растворы дезинфицирующего средства (согласно таблице 1) равномерно наносили методом орошения на тест-объекты из расчёта 0,3 л/м² площади.
На контрольные тест-объекты вместо раствора средства наносят такое же количество воды, которую использовали для приготовления раствора препарата.
С тест-объектов, обработанных испытуемыми растворами препаратов, материал для исследования отбирают через соответствующий период времени (согласно таблице 1).
Вирусный материал соскабливали, добавляли по 4,5 см³ физиологического раствора, экстрагируют при комнатной температуре в течение 30 минут, затем центрифугируют 15 мин. при 3000 об/мин. Надосадочную жидкость используют для заражения куриных эмбрионов.
Надосадочную жидкость с одного тест-объекта вводили 8 куриным эмбрионам и 8 КЭ использовали в качестве контроля. Зараженные КЭ инкубировали при 37⁰С в течение 72-96 часов. Овоскопию зараженных КЭ проводили ежедневно. КЭ, павшие в течение 24 часов после заражения отбраковывали (неспецифическая гибель). Павшие КЭ в последующие сроки инкубации помещали в холодильник. По окончании инкубации оставшиеся живыми КЭ также помещали в холодильник не менее чем на 12 часов.
С ЭЭЖ охлаждённых КЭ ставили РГА для выявления вируса. С этой целью с каждого КЭ берут каплю ЭЭЖ и помещали на предметное стекло, затем к этой ЭЭЖ добавляют по капле 1-2%-ных куриных эритроцитов и компоненты смешивают покачиванием стекла. Смесь ЭЭЖ и эритроцитов оставляют на контакт при комнатной температуре в течение 10-15 минут и учитывают результаты реакции.
Дезинфекцию признавали эффективной, если при заражении КЭ материалом с исследуемых тест-объектов не отмечали гибели КЭ и результат исследования ЭЭЖ в реакции гемагглютинации был отрицательным. 

2. Результаты исследований
Антимикробную активность средства дезинфицирующего Зисептал 500 изучали в жидких и на твердых питательных средах с возбудителями колибактериоза и стафилококкоза с использованием белковой нагрузки и без нее.
Минимальную бактерицидную концентрацию (МБК) определяли методом серийных разведений в ДТСБ с последующим высевом на ДТСА на чашках Петри. В таблице 2 представлены результаты определения бактериостатического и бактерицидного действия средства дезинфицирующего Зисептал 500.

В результате проведенных испытаний установлено, что средство Зисептал 500 обладает антимикробной активностью в отношении тест-культур грамотрицательных (Е. coli) и грамположительных (S. aureus) микроорганизмов в следующих концентрациях, принимая средство за 100 % вещество (таблица 2):
МПК_E.coli – 0,0312 %;
МБК_E.coli – 0,0312 %;
МПК_S.aureus – 0,25 %;
МБК_S.aureus – 0,25 %;
При добавлении высокомолекулярного белка происходит снижение бактерицидной активности средства в отношении Е. coli в 32 раза, в отношении S. аureus в 2 раза.
Исследование эффективности образца средства дезинфицирующего Зисептал 500 в отношении вируса гриппа птиц (ВГП) проводили в соответствии с техническим заданием по схеме, представленной в таблице 1. Результаты представлены в таблице 3.

Результаты, представленные в таблице 3 свидетельствуют о том, что препарат Зисептал 500 при обработке впитывающей шероховатой поверхности с белковой нагрузкой эффективен в отношении вируса гриппа птиц в виде 1 % рабочего раствора при экспозиции 1 (один) час. При обработке невпитывающей поверхности с белковой нагрузкой эффективен в отношении вируса гриппа птиц в виде 0,5 % рабочего раствора при экспозиции 30 минут.

Заключение
Средство дезинфицирующее Зисептал 500 (Zyseptal 500) по результатам лабораторных исследований обладает бактерицидной и бактериостатической активностями в отношении тест-культур грамотрицательных (Е. coli) и грамположительных (S. aureus) микроорганизмов обеспечивая их инактивацию при концентрации 0,0312 % и 0,25 % соответственно от исходной, без добавления белковой нагрузки.
Средство дезинфицирующее Зисептал 500 (Zyseptal 500) обеззараживает тест-поверхности имитирующие объекты птицеводческих помещений (впитывающие шероховатые поверхности из бетона), контаминированные вирулентным вирусом гриппа птиц с белковой нагрузкой при однократном орошении 1,0% рабочим раствором при экспозиции 60 минут и более.
Дезинфицирующее средство Зисептал 500 (Ziseptal 500) полностью обеззараживает тест-поверхности имитирующие транспортные средства (невпитывающие поверхности из металла), контаминированные вирулентным вирусом гриппа птиц с белковой нагрузкой при однократном орошении 0,5 % и выше рабочим раствором при экспозиции 30 минут и более при норме расхода 0,3 л/м².
Средство дезинфицирующее Зисептал 500 (Zyseptal 500) может в данных режимах применяться в очагах заражения вирусом гриппа птиц для дезинфекции объектов в соответствии с действующими инструктивными документами.